WWW.LIB.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Электронные матриалы
 


«Сибирский медицинский журнал, 2012, № 4 © ЛИВАНОВА Н.Н., БОРГОЯКОВ В.Ю., ЛИВАНОВ С.Г., ФОМЕНКО Н.В. 2012 УДК 576.895.421 ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИРОДНЫХ ОЧАГОВ КЛЕЩЕВЫХ ...»

Сибирский медицинский журнал, 2012, № 4

© ЛИВАНОВА Н.Н., БОРГОЯКОВ В.Ю., ЛИВАНОВ С.Г., ФОМЕНКО Н.В. 2012

УДК 576.895.421

ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИРОДНЫХ ОЧАГОВ КЛЕЩЕВЫХ БОРРЕЛИОЗОВ НОВОСИБИРСКОГО

НАУЧНОГО ЦЕНТРА И НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ

Наталья Николаевна Ливанова1,2, Вячеслав Юрьевич Боргояков1, Станислав Генрихович Ливанов2,

Нина Викторовна Тикунова1, Наталия Владимировна Фоменко1,3 (1Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН – акад. РАН В.В. Власов, лаборатория молекулярной микробиологии, зав. – д.б.н. Н.В. Тикунова, лаборатория генной диагностики, зав. – к.м.н. Е.Д. Чикова; 2Институт систематики и экологии животных СО РАН – д.б.н., проф. В.В. Глупов, лаборатория зоомониторинга, зав. – д.б.н., проф. Ю.С. Равкин; 3ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, генеральный директор – М.Д. Хусаинов) Резюме. Показано, что в лесопарковой зоне Новосибирского научного центра устойчиво сообитают I. persulcatus и I. pavlovskyi, при явном преобладании последнего. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей фрагмента гена COI клещей двух видов из Новосибирской обл. с соответствующими опубликованными продемонстрировал высокую степень родства с последовательностями представителей этих видов, обитающими на территории Японии и Китая. Установлено, что I. pavlovskyi наравне с таёжным клещом участвует в поддержании циркуляции боррелий. От клещей двух видов получены первичные изоляты боррелий группы Borrelia burgdorferi s.l. и В.

miyamotoi.

Ключевые слова: Новосибирская область, Ixodes persulcatus, Ixodes pavlovskyi, численность, распределение, боррелии, изоляты, молекулярное типирование.

CHARACTERISTIC OF NATURAL FOCI OF TICK BORNE BORRELIOSIS IN NOVOSIBIRSK

SCIENTIFIC CENTER AND NOVOSIBIRSK REGION RUSSIA

N.N. Livanova1,2, V.Yu. Borgoyakov1, S.G. Livanov2, N.V. Tikunova1, N.V. Fomenko1,3 (1Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk, Russia; 2Institute of Systematics and Ecology of Animals SB RAS, Novosibirsk, Russia; 3JSC “VECTOR-BEST”, Novosibirsk, Russia) Summary. We have detected Ixodes persulcatus and I. pavlovskyi in the park area of Novosibirsk scienti c centre with the domination of I. pavlovskyi. e analysis of nucleotide gene sequence of COI gene fragments have demonstrated a high level of relationship between the gene sequence of ticks of mentioned above species distributed in Novosibirsk region, Russia, and the gene sequence published for the same species inhabiting China and Japan. We have determined that I. pavlovskyi along with the Taiga tick participates in circulation of Borrelia infections. e primary isolates of Borrelia belonging to groups of Borrelia burgdorferi s.l. and В. miyamotoi were obtained from both species of ticks.

Key words: Novosibirsk region (Russia), Ixodes persulcatus, Ixodes pavlovskyi, abundance, distribution, Borrelia, Isolates, Molecular typing.

Иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) – группа зоне Новосибирского научного центра (ННЦ) и прилеприродно-очаговых трансмиссивных инфекций, кото- гающих территориях. Существование 2 видов клещей рые занимают первое место среди заболеваний, пере- Ixodes persulcatus (Schulze, 1930) и Ixodes pavlovskyi (поддаваемых клещами в умеренных температурных зонах вид I. pavlovskyi occidentalis Filip. et Pan.,1998) требует северного полушария [1,9,20]. Только в Европе ежегод- оценивать роль их симпатрии в эпидемической напряно описывается около 85.000 случаев клещевого бор- женности очагов клещевых боррелиозов. В частности, релиоза [22]. В России в 2007 г., согласно официальной для природных очагов боррелиозов, поддерживаемых с статистике Федеральной службы по надзору в сфере участием лесного Ixodes ricinus (Latr. 1758) и таёжного I.





защиты прав потребителей и благополучия человека, persulcatus клещей, высказано предположение о второзаболеваемость клещевыми боррелиозами составила в степенной роли первого в качестве переносчика борреабсолютных показателях 7234 случая или 5.05:100.000 лий, а их выявление зависит от присутствия таёжного населения. В 2008 году этот показатель вырос на 6,6%. клеща [1]. Рассматривается и иная точка зрения, согласСибирский федеральный округ (СФО) занимает третье но которой боррелии могут встречаться либо у одного, место по заболеваемости ИКБ среди регионов России, либо у другого вида клеща [3]. В связи с изложенным, в уступая Уральскому и Северо-Западному федеральным настоящем сообщении приводятся первые обобщенные округам. С 1992 по 2004 гг. среднегодовой показатель за- сведения о природных очагах клещевых боррелиозов в болеваемости в СФО составил 10,08 на 100 тысяч насе- зоне симпатрии близкородственных видов клещей, расления, Новосибирская область занимает пятое место по положенных в лесопарковой зоне Новосибирского назаболеваемости в СФО по данным инфекциям [10]. учного центра.

Начиная с конца 70-х годов прошлого столетия, в рамках долговременных наблюдений за природными Материалы и методы очагами клещевого энцефалита для лесопарковой зоны ННЦ установлен видовой состав и распределение ик- Учёты и отлов клещей проведены в мае-июне 2009содовых клещей [6,11]. Несколько позже в свет вышла 2011 гг. на территории лесопарковой зоны ННЦ и его серия работ, в которых приведена подробная характе- окрестностей (83°05'-83°49' в.д. и 54°48'-54°50' с.ш.).

ристика основных компонентов природных очагов ик- Обследованы основные типы местообитаний (сосносодовых клещевых боррелиозов [8,14,21]. В 2008 г. кле- вые с примесью берёзы и осины, берёзово-осиновые и щах, отловленных на рассматриваемой территории, де- осиново-берёзовые леса, сосново-берёзовые и берёзовотектированы Borrelia miyamotoi – боррелии группы кле- сосновые леса на залежах, зарастающих берёзой). В щевых возвратных лихорадок (tick-born relapsing fever, Новосибирском (в пределах координат 82°58'-83°19' в.д.

TBRF, КВЛ) [12,13,16,17]. Вместе с тем, данные послед- и 55°00'-55°02'с.ш.) и Тогучинском районах (83°21'-84°21' них лет позволяют с новых позиций рассматривать во- в.д. и 54°53'-54°53' с.ш.) обследованы осиново-берёзовые прос о характере распределения клещей-переносчиков леса, берёзовые колки среди полей и залежей, осиновои возбудителей клещевых боррелиозов в лесопарковой берёзовые и берёзовые леса с примесью сосны, а также Сибирский медицинский журнал, 2012, № 4 берёзово-сосновые леса с включениями осинников. За высоко гомологичны (99-100%). При этом выявлено 7 весь период работ учеты выполнены в 11 типах местоо- различных вариантов нуклеотидных последовательнобитаний, отработано 48 ч., по совокупности пройдено стей, которые на основании результатов филогенетичекм, на флаг отловлено более 3000 клещей. ского анализа с высокой достоверностью формируют В 2010-2011 гг. проведено сопоставление данных мор- две группы (рис. 1). В первой группе последовательфологического анализа клещей I. pavlovskyi и I. persulcatus с таковыми, полученными при анализе фрагмента гена цитохром оксидазы (COI) митохондриального генома клещей.

Для этого, из клещей I. pavlovskyi (23 особи) и I. persulcatus (33) экстрагированы суммарные нуклеиновые кислоты с помощью набора «Проба НК» (ДНК-технология, Москва). ДНК клещей выявлена с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) в присутствии праймеров из области гена CO1. Подробное описание использованных молекулярногенетических методов приведено [Ливанова и др. (в печати)]. Определенные последовательности гена CO1 внесены в базу данных GenBank под номерами: JQ823024, JQ823025, JQ867068, JQ867069, JQ867070, JQ867071, JQ867072.

Изоляция боррелий из клещей обоих видов проведена с использованием искусственной питательной среды BSK-H и набора антибиотиков (Sigma, США). Все процедуры производились с соблюдением техники безопасности [15,16]. Контроль за посевами вели визуально по окраске среды. При изменении Рис. 1. Филограмма нуклеотидных последовательностей фрагмента гена окраски среды проводили первичную иден- субъединицы I цитохром оксидазы С иксодовых клещей, отловленных в тификацию с помощью фазово-контрастной Новосибирский обл. Значения статистической достоверности приведены микроскопии препаратов «раздавленной в узлах дерева. Внизу показана шкала дивергенции. Последовательности из данной работы выделены квадратами (для I. persulcatus) и капли». Выявление ДНК боррелий проводи- треугольниками (для I. pavlovskyi).

ли методом двухраундовой мультиплексной ПЦР. Для боррелий комплекса В. burgdorferi s. 1. использованы праймеры, направленные к генам ности фрагмента гена СОI генома митохондрий, поS и 23 S рРНК и позволяющие амплифицировать ва- лученные в ходе нашего исследования от I. persulcatus, риабельный межгенный спейсер 5S-23S рРНК. Для бор- кластеризовались с соответствующими последоварелий вида В. miyamotoi использованы праймеры, на- тельностями, ранее опубликованными для этого вида правленные к гену glpQ. Подробное описание методов клещей. Вторая группа сформирована полученными приведено ранее [4]. Всего исследовано 206 особей I. нами для I. pavlovskyi, и единственной, имеющейся в pavlovskyi и 199 – I. persulcatus, получено и проанализи- базе данных GenBank. Депонированная последовательность (GenBank AB231669) получена от потомков I.

ровано 26 первичных изолятов.

pavlovskyi с о. Хоккайдо (Япония), выращенных в лабораторных условиях. К настоящему времени в базе Результаты и обсуждение данных GenBank депонировано восемь последовательКак показали исследования, на территории лесо- ностей соответствующего фрагмента гена СОI митопарковой зоны Новосибирского научного центра до- хондрий I. persulcatus с указанием места отлова клещей минирует клещ I. pavlovskyi. Доля этого вида в местоо- (GenBank ABO73725, HM193866, HM193867, HM193868, битаниях многоэтажной и коттеджной застройки (га- HM193869, HM193870, HM193871, HM193872).

зоны, кустарники внутриквартальные светлохвойные Филогенетический анализ последовательности фраги смешанные леса верхней зоны ННЦ) достигает 98%, мента гена СОI митохондрий I. persulcatus, отловленных а средние показатели обилия – 950 особей на 1 га. По в Новосибирской области, показал, что они ближе всего мере удаления от жилой зоны (на 15-20 км) показате- кластеризовались с таковой I. persulcatus, обитающих в ли обилия I. pavlovskyi снижаются в 2,5 раза, а таёжного Японии на о. Хоккайдо (GenBank ABO73725). Вместе клеща – увеличиваются с 50 до 400 особей на гектар. В с тем, последовательность JQ867068, обнаруженная окрестностях ННЦ для I. pavlovskyi относительно вы- в образцах от 10 клещей, совпадала с некоторыми нусокие показатели учетов зарегистрированы в сосняках клеотидными последовательностями рассматриваемого с примесью берёзы и осины (2200 особей на 1 га) и в фрагмента гена таёжных клещей с различных удаленных берёзово-осиновых и осиново-берёзовых лесах с вклю- территорий Китая (рис. 1). В целом, анализ филограммы чениями осинников (1900). Меньше клещей этого вида показывает, что внутри видов I. pavlovskyi и I. persulcatus, в сосново-берёзовых и берёзово-сосновых лесах (900), обитающих на территории Азии, последовательности единичные встречи клещей этого вида отмечены на за- исследуемого фрагмента гена СОI высоко консервативлежах, зарастающих берёзой. Относительно высокое ны и при проведении молекулярно-генетических исобилие таёжных клещей в окрестностях ННЦ характер- следований позволяют однозначно относить клещей к но для берёзово-осиновых и осиново-берёзовых лесов одному из указанных видов.

В ходе проведения исследования на зараженность (600), на зарастающих залежах I. persulcatus не встречен.

При большей удаленности (в Тогучинском р-не) зареги- клещей боррелиями получено 78 первичных изолятов.

стрирован только таёжный клещ, численность которого При микроскопическом исследовании во всех образв среднем для всех обследованных местообитаний со- цах зафиксированы спирохетоподобные клетки. Из них только 26 сохранили способность к росту при втором ставила 2.000 особей на 1 га.

Для последовательностей фрагмента митохондри- пассаже. Установление видовой принадлежности изолиального гена СОI клещей I. pavlovskyi и I. persulcatus раз- рованных боррелий показало, что первичные изоляты мером 650 п.н. сравнительный анализ показал, что они В. miyamotoi не сохранили способность к дальнейшему Сибирский медицинский журнал, 2012, № 4

–  –  –

Информация об авторах: Ливанова Наталья Николаевна – ст.н.с., к.б.н., 630090 г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, 8, тел. (383) 363-51-57, e-mail: nata-livanova@yandex.ru; Боргояков Вячеслав Юрьевич – аспирант;

Ливанов Станислав Генрихович – ст.н.с., к.б.н.; Тикунова Нина Викторовна – зав.лабораторией, доцент, д.б.н.;

Фоменко Наталия Владимировна – ст.н.с., к.б.н.

© МОРОЗОВА В.В., ФОМЕНКО Н.В., СТРОНИН О.В., МАТВЕЕВ А.Л., ТИКУНОВА Н.В. 2012 УДК 577.27

–  –  –

Вера Витальевна Морозова1, Наталья Владимировна Фоменко1,2, Олег Владимирович Стронин3, Андрей Леонидович Матвеев1, Нина Викторовна Тикунова1 (1Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, директор – акад. РАН В.В. Власов; 2ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, генеральный директор – М.Д. Хусаинов, Филиал ФГПУ НПО «Микроген» МЗ РФ НПО «Вирион», Томск, директор – В.П. Морозов) Резюме. В работе исследовали репертуары генных сегментов, кодирующих одноцепочечные антитела человека, направленные к антигенам Borrelia garinii.

Антитела отбирали из комбинаторных библиотек, полученных на основе мРНК лимфоцитов периферической крови здоровых доноров (N-библиотека) и больных рассеянным склерозом (MS-библиотека). Среди специфичных к антигенам B. garinii антител, отобранных из MS-библиотеки, выявлены антитела, содержащие сегменты VH4-39, появляющиеся при рассеянном склерозе, и VH6, экспрессия которого в норме показана только для эмбриональных стадий развития организма. Генные сегменты, кодирующие больше трети антител, отобранных из MS-библиотеки, имели низкий процент гомологии генам зародышевой линии, в то время как гены антител, отобранных из N-библиотеки, высокогомологичны генам зародышевой линии. Методом тИФА показано, что популяции антител, аффинно обогащенных на антигены B. garinii, эффективно связывались с основным белком миелина. Возможно, белки боррелий могут вызывать аутоиммунную реакцию организма, направленную против структур нервной системы, за счет механизмов молекулярной мимикрии.

Ключевые слова: Borrelia garinii, нейроборрелиоз, комбинаторная библиотека антител, рассеянный склероз.

REPERTOIRE OF GENE SEGMENTS ENCODING HUMAN SINGLE CHAIN ANTIBODIES

SELECTED AGAINST BORRELIA GARINII ANTIGENS

V.V. Morozova1, N.V. Fomenko1,2, А.L.Matveev1,O.V.Stronin3, N.V.Tikunova1 (1Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, 2Joint Stock Company “Vector-Best’, Federal State Unitary Company “Microgen Scienti c Industrial Company for Immunobiological Medicines”) Summary. Repertoires of gene segments, coding single-chain human antibodies against Borrelia garinii antigens, were explored. Antibodies were selected from combinatorial libraries of single-chain antibodies (scFv), produced using mRNA from PBLs of healthy donors (N-library) and patients with multiple sclerosis (MS-library). Among gene segments from MSlibrary, encoding B.garinii-speci c antibodies, VH4-39, incident for MS, and VH6, normally expressing in embryo, were identi ed. More than a third of gene segments encoding B. garinii-speci c antibodies from autoimmune library possessed low homology with germ line genes, at the same time gene segments from naпve library were highly homologous to germ line genes. Populations of antibodies, enriched against B.garinii antigens, e ectively bound myelin basic protein in ELISA.

Probably, borrelia proteins may cause in organism autoimmune reaction against nervous system, using molecular mimicry mechanism.

Key words: Borrelia garinii, neuroborreliosis, combinatorial antibody library, multiple sclerosis.

Иксодовый клещевый боррелиоз (ИКБ) – полиси- при ИКБ нередко имитирует рассеянный склероз (РС) стемное заболевание, при котором возможно поражение [3,12]. Частота выявления энцефаломиелита при ИКБ опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно- невысока и составляет в среднем 4-5% от всех случаев сосудистой систем, а также кожи [6]. Наиболее тяжелое нейроборрелиоза [1]. Чаще всего наблюдается медленпроявление ИКБ – нейроборрелиоз, характеризующий- ное развитие поражения нервной системы с постепенся поражением как центральной, так и периферической ным углублением патологического процесса, имитирунервной системы [7]. На территории России широко ющее другие нозологические формы, в частности РС и распространены Borrelia garinii и Borrelia afzelii, относя- рассеянный энцефаломиелит. Известно, что у больных щиеся к комплексу B. burgdorferi sensu latо [14]. Анализ с хроническим нейроборрелиозом в ряде случаев в клиники при ИКБ в различных регионах России указы- спинномозговой жидкости (СМЖ) могут определятьвает на преобладание неврологической симптоматики. ся антитела к основному белку миелина [11]. Сходство Принято считать, что с неврологическими проявления- симптоматики РС и поражений нервной системы при ми ИКБ ассоциирован вид B. garinii [5]. ИКБ затрудняют диагностику и идентификацию забоПоздние поражения нервной системы при ИКБ, левания.

проявляющиеся через месяцы и годы после начала забо- Одним из современных инструментов для исследолевания, зачастую после длительного латентного перио- вания иммунного ответа человеческого организма на да, включают в себя признаки поражения всех отделов различные антигены является метод фагового дисплея нервной системы. Выделяют разные варианты его тече- антител. Этот метод подразумевает создание и испольния: прогрессирующий энцефаломиелит, хроническую зование комбинаторных библиотек Fab-фрагментов или радикулополиневропатию, хронический лимфоцитар- одноцепочечных антител (оцАТ), экспонированных на ный менингит, церебральный васкулит, энцефалопатию поверхности нитчатых бактериофагов. Полагают, что и др. [1,4]. Хроническое течение ИКБ в России изучено популяция антител в такой библиотеке отражает ремало, что связано с отсутствием общепринятых кри- пертуар антител в организме человека. Ранее на основе териев диагностики и доступных методов идентифи- мРНК лимфоцитов периферической крови здоровых кации инфекции. Прогрессирующий энцефаломиелит доноров и больных РС были сконструированы, соот-





Похожие работы:

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ ЗАПОРОЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ФИЗИЧЕСКОЙ И КОЛЛОИДНОЙ ХИМИИ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ И ВЫПОЛНЕНИЮ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ ПО МЕДИЦИНСКОЙ ХИМИИ ДЛЯ СТУДЕНТОВ МЕДИЦИНСКОГО ФАКУЛЬТЕТА Тема: Кислотно-основны...»

«© 2006 г. Ю.Ф. ФЛОРИНСКАЯ ТРУДОВАЯ МИГРАЦИЯ ИЗ МАЛЫХ РОССИЙСКИХ ГОРОДОВ КАК СПОСОБ ВЫЖИВАНИЯ ФЛОРИНСКАЯ Юлия Фридриховна кандидат географических наук, старший научный сотрудник Центра демографии и экологии человека Института народохозяйственного прогнозирования РАН. Трудности переходного п...»

«Самарская Лука: проблемы региональной и глобальной экологии. 2010. – Т. 19, № 1. – С. 38-50. УДК 001.92(092) "ПРИНЦ ЖИГУЛЕВСКИЙ" (К ЮБИЛЕЮ СЕРГЕЯ ВЛАДИМИРОВИЧА САКСОНОВА) © 2010 С.А. Сенатор* Институт экологии Волжского бассейна РАН, г. Тольятти (Россия) Поступила 02 декабря 2009 г. В статье приводятся основные засл...»

«1. Цели подготовки Цель изучить комплексную микробиологическую, – вирусологическую, эпизоотологическую, микологическую, микотоксикологическую и иммунологическую диагностику инфекционной патологии животных и птиц для определения стратегии и такти...»

«ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова кафедра биологии и общей генетики Дисциплина по выбору "Медико-биологические основы экологии"   Презентация по модулю № 5 Круговороты веществ доцент кафедры биологии и об...»

«ХИМИЯ И ТЕХНОЛОГИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ – V ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ – Уфа, 2008 Российская академия наук Уральское отделение, Коми научный центр, Институт химии Уфимский научный центр, Институт органической химии Россий...»

«белорусских городов. Кроме того, были выделены новые опорные центры: Давид-Городок (высокий историко-культурный и религиозный потенциал), Логишин (культурно-познавательный), новый перспе...»

«ПРОБЛЕМА НАСЛЕДОВАНИЯ ПРИОБРЕТЕННЫХ ПРИЗНАКОВ В ЭВОЛЮЦИОННОЙ БИОЛОГИИ от Спенсера и Вейсмана до наших дней И. И. Дзеверин Институт зоологии имени И. И. Шмальгаузена НАН Украины Терминология и некоторые предварительные замечания.”для доказательства наследования приобретенного признака необходимо показать, что у родител...»

«Программа дисциплины "Морская экология" Автор: доцент А.В. Полякова Цели: – формирование базовых представлений о современных проблемах морской экологии и природопользования, о закономерностях развития морских экосистемах, основных взаимосвязях между морскими организмами и средой обитания, о факторах, определяющих биологическую продуктивнос...»

«Серия 4. Химическое машиностроение и инженерная экология 3. Гринберг Г.А. О решении обобщённой задачи Стефана о промерзании жидкости, а также родственных задач теории теплопроводности, диффузии и др.// ХТФ, 1967. Т.37 №9. Экологические и энергет...»








 
2017 www.lib.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - электронные матриалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.