WWW.LIB.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Электронные материалы
 

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 528 868 C1 (51) МПК C12N 5/12 (2006.01) C12N 5/18 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ...»

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13)

RU 2 528 868 C1

(51) МПК

C12N 5/12 (2006.01)

C12N 5/18 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

2013145639/10, 10.10.2013

(21)(22) Заявка: (72) Автор(ы):

Антонов Валерий Алексеевич (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента:

Храпова Наталья Петровна (RU), 10.10.2013 Булатова Татьяна Валерьевна (RU), Пименова Екатерина Владимировна (RU),

Приоритет(ы):

Корсакова Ирина Игоревна (RU), (22) Дата подачи заявки: 10.10.2013 RU Пьянков Олег Викторович (RU), (45) Опубликовано: 20.09.2014 Бюл. № 26 Пьянков Степан Александрович (RU), Серегин Сергей Викторович (RU), (56) Список документов, цитированных в отчете о Плясунов Игорь Владимирович (RU), поиске: SHI YONG-XIA, et al., "Expression of Сафронов Павел Федорович (RU), NP protein of crimean-congo hemorrhagic Петров Владимир Семенович (RU), fever virus in E. coli and preparation of Агафонов Александр Петрович (RU), monoclonal antibodies against NP protein", Сергеев Александр Николаевич (RU), Chinese Journal of Health Laboratory Дятлов Иван Алексеевич (RU), Technology, Jun 2009; Vol 19, No 6, pp. 1309

–  –  –

(54) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО MUS MUSCULUS L.



CCHFV Vd-2-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА 1E2/E5 К ВИРУСУ КРЫМ-КОНГО

ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии и гибридных клеток животного Mus musculus L.

представляет собой штамм культивируемых CCHFV Vd-2, депонированный в Государственную

–  –  –

(56) (продолжение):

Diagnosis of Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Using a Novel Monoclonal Antibody", Journal of Medical Virology 77: (2005), pp. 83-88. СМИРНОВА С.Е. "Мировой ареал вируса крымской-конго геморрагической лихорадки", Бюллетень сибирской медицины, 2006, Приложение 1, стр. 79-87.

US 2011195090 A1, 11.08.2011

–  –  –

Изобретение относится к биотехнологии получения гибридом-продуцентов моноклональных антител (МКА) заданной специфичности и может быть использовано в вирусологических и иммунологических исследованиях при создании тест-системы иммуноферментной, предназначенной для обнаружения антигенов вируса Крым-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) - возбудителя опасного трансмиссивного природноочагового заболевания человека, входящего в перечень инфекционных (паразитарных) болезней, требующих проведения мероприятий по санитарной охране территории Российской Федерации [1, 2]. Штамм-продуцент моноклональных антител к вирусу ККГЛ назван CCHFV Vd-2 (1E2/E5). Штамм депонирован в Государственную коллекцию 10 патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-ОБОЛЕНСК» под номером H-26.

При выполнении работ по обнаружению возбудителя в пробах клинического и полевого материала руководствуются принципами организации исследований материала, подозрительного на зараженность вирусом ККГЛ, в учреждениях Роспотребнадзора, 15 изложенных в «Практических руководствах» [3, 4], а также в МУК 4.2.3007-12 [5].

Согласно этим документам, одним из регламентированных иммунодиагностических методов обнаружения вируса ККГЛ является сэндвич-вариант иммуноферментного анализа (ИФА).

В настоящее время для иммуноферментного выявления антигенов вируса ККГЛ 20 осуществляется выпуск «Тест-системы иммуноферментной для выявления вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки «Векто Крым-КГЛ-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия; Регистрационный номер РК-ИМН-5№007764, дата регистрации 14.12.2010), изготавливаемой на основе поликлональных антител к вирусу ККГЛ.

Известно, что применение МКА в качестве основы средств обнаружения возбудителей 25 опасных инфекционных заболеваний, в том числе и вируса ККГЛ, открывает новые перспективы для создания высокоэффективных стандартизированных препаратов для методов экспресс-обнаружения и идентификации искомых патогенов. При создании тест-систем иммуноферментных для выявления того или иного возбудителя, компоненты которых предназначены для выполнения сэндвич-варианта твердофазного ИФА, 30 используют, как правило, два варианта МКА различной эпитопной направленности, одно из которых выполняет функции «захвата» антигена, а второе - функции детекции образовавшегося иммунного комплекса. Во избежание ошибок в оценке результатов реакции подбор наиболее эффективных пар моноклональных ингредиентов проводят из числа вариантов, входящих в панель МКА, узнающих эпитопы на диагностически 35 значимых антигенных мишенях конкретного возбудителя.

О возможностях применения МКА к вирусу ККГЛ сообщали отечественные и зарубежные авторы [6, 7, 8, 9, 10, 11, 12].

Ими были получены экспериментальные образцы препаратов для применения в иммуноферментном и иммунофлуоресцентном методах детекции вируса ККГЛ, 40 апробированные в лабораторных условиях, подтверждены основные преимущества работы с МКА: возможность работы с гомогенным по составу сырьем для изготовления высокоактивных иммунодиагностических реагентов заданной специфичности. Данные о внедрении этих диагностических средств в практическое здравоохранение отсутствуют.

В настоящее время существует только один зарегистрированный в качестве 45 медицинского изделия набор, предназначенный для выявления вируса ККГЛ в биологических жидких пробах (набор для иммуноферментного анализа производства ЗАО «Вектор Бест», Новосибирск, кат.№D-5056, «ВектоКрым-КГЛ-антиген», РУ №ФСР 2010/07327). Ввиду отсутствия стандартных препаратов для контроля качества

Стр.: 5 RU 2 528 868 C1

лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) неизвестна относительная чувствительность и специфичность этого набора.

Цель изобретения - получение штамма гибридомы-продуцента высокоспецифичного, моноклонального антитела - компонента для изготовления тест-системы иммуноферментной, предназначенной для обнаружения антигенов вируса ККГЛ в пробах биологического материала.

Получение гибридомы достигается гибридизацией двух типов клеток: спленоцитов инбредной мыши линии BALB/c, иммунизированной антигеном вируса ККГЛ, и клеток мышиной миеломы.

Гибридома-продуцент МКА 1E2/E5 получена слиянием спленоцитов иммунной мыши линии BALB/c с клетками мышиной миеломы Sp 2/0 в присутствии конъюгирующего агента - полиэтиленгликоля (ПЭГ-4000), последующего рассева взвеси клеток в лунки 96-луночных культуральных пластин, выращивания в селективной среде, отбора первичного клона, его клонирования и реклонирования методом лимитирующих 15 разведений. Полученный штамм, названный CCHFV Vd-2 (1E2/E5), характеризуется следующими признаками.

Культуральные признаки. Для культивирования гибридомы in vitro используют среду RPMI-1640 с 15% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 2 mM L-глютамина, 10 mM Hepes, 4 mM пирувата натрия.

Клетки культивируют при 37°C в атмосфере 5-7% CO2 и влажности 70-80%. Пересевы делают каждые 3-4 сут, интенсивность роста популяции клеток контролируют при просмотре лунок пластин в инвертированном микроскопе. Кратность рассева 1:4-1:8.

Характер роста культуры полусуспензионный.

Культивирование в организме сингенного животного. Для накопления асцита in vivo клетки гибридомы вводят внутрибрюшинно предварительно праймированным мышам линии BALB/c, по 2·106-4·106 клеток на мышь. Асцит образуется через 2-4 недели.

Продуктивность штамма. Продукция МКА в среде культивирования составляет 0,53 мкг/мл, в асцитической жидкости - 8-10 мг/мл. Объем асцитической жидкости в среднем равен 3-4 мл.

Характеристика получаемого продукта. Антитела относятся к классу IgG1. Они специфически взаимодействуют с антигеном вируса ККГЛ. Специфичность взаимодействия определяют с помощью твердофазного иммуноферментного метода (ТИФМ).

35 Криоконсервирование. Вне периода экспериментов по накоплению препаративных количеств МКА 1E2/E5 клетки гибридомы сохраняют в криоконсервированном состоянии. Для перевода их в такое состояние взвесь клеток гибридомы в количестве 4·106 клеток в 1 мл защитной среды, состоящей из среды RPMI-1640 с 20% ЭТС и 7% диметилсульфоксида, переносят в пластиковые ампулы.





Ампулы помещают в аппарат для криоконсервирования биологического материала. Используют режим постепенного программируемого понижения температуры: в течение 20 минут - снижение температуры образца до 0°C, далее со скоростью 1°C в минуту до температуры минус 40°C и со скоростью 5°C в минуту от минус 40°C до минус 70°C. Затем ампулы погружают в биохранилище с жидким азотом и хранят до момента использования. Размораживание производят при 37°C на водяной бане в течение 2-3 минут. Жизнеспособность клеток после размораживания составляет 80% и более.

Пример 1. Получение штамма гибридомы-продуцента.

Мышь линии BALB/c

Стр.: 6 RU 2 528 868 C1

иммунизируют инактивированным антигеном вируса ККГЛ. Для стимуляции Влимфоцитов мыши используют схему дробного введения минимальных доз антигена в течение относительно короткого периода времени (5 недель). Первую инъекцию (0 день) выполняют подкожно в область спины смесью антигена (15 мкг антигена в 0,3 мл физиологического раствора (ФР) с равным объемом неполного адъюванта Фрейнда).

Вторую, третью и четвертую инъекции (7, 14 и 21 день) - внутрибрюшинно по 15 мкг антигена в 0,3 мл ФР, пятую бустирующую инъекцию - через 2 недели внутриселезеночно (20 мкг). Суммарная доза антигена не должна превышать 80 мкг белка по Бредфорду.

Через 3 суток после этого выполняют гибридизацию 1·108 спленоцитов иммунной мыши с 1·107 клеток мышиной миеломы в присутствии 1 мл 50% ПЭГ-4000 в течение 2 минут при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Затем к этой смеси при постоянном перемешивании последовательно добавляют 1, 2, 4, 8 мл бессывороточной среды, каждую порцию в течение 2 минут. После этого клетки центрифугируют при 800-1000 об/мин в течение 10 минут. Осадок ресуспендируют в селективной HAT-среде с 15% ЭТС, 2 mM L-глютамина, 10 mM Hepes, 4 mM пирувата натрия. Клетки высевают в 96-луночную пластину с фидером, по 2,5·105-5·105 клеток в лунку. Смену среды производят каждые 3-4 дня. Скрининг антителопродуцирующих гибридных клонов выполняют не ранее 7-10 суток после рассева в 96-луночные пластины. При просмотре лунок регистрируют те из них, в которых имеет место характерный рост групп клеток, затем из них отбирают не более 50 мкл культуральной среды для исследования в непрямом варианте ТИФМ. Положительные результаты этого метода скрининга, полученные с пробой из одной и той же лунки не менее трех раз, являются основанием для отбора первичного клона-продуцента целевого продукта. Все первичные клоны, отобранные в течение месяца, клонируют и реклонируют методом лимитирующих разведений, производя высевы в лунки предварительно подготовленной 96-луночной пластины с фидером - перитонеальными макрофагами сингенной интактной мыши (по 4-6·104 клеток в каждой лунке). На этом этапе используют среду RPMI-1640 с 15% ЭТС и необходимыми добавками. После второго клонирования каждого из первичных вариантов клонов формируют рабочую коллекцию гибридом-продуцентов МКА заданной специфичности. Среди продуктивных клонов, секретирующих моноклональные иммуноглобулины против антигена вируса ККГЛ, селекционирован клон-продуцент CCHFV Vd-2 (1E2/E5).

Пример 2. Накопление МКА.

Ампулу с клетками гибридомы достают из биохранилища с жидким азотом и быстро размораживают на водяной бане при 37°C.

Для отмывания восстановленной суспензии клеток от примесей защитной среды ее переносят в центрифужную пробирку с 10 мл бессывороточной среды RPMI-1640 и осторожно наслаивают на поверхность жидкости. Клетки осаждают центрифугированием при 800-1000 об/мин, удаляют надосадок, а осевшие клетки вновь суспендируют в полной среде для культивирования гибридомы (RPMI-1640 с 15% ЭТС и необходимыми добавками). Клетки высевают в 5-6 лунок 12-луночной пластины или в матрас с площадью 25 см2. При увеличении колонии до размеров, покрывающих половину площади и более производят рассевы на большие площади при обязательном контроле антителопродукции. Условия культивирования in vitro, тактика отбора и замены среды культивирования, рассева размножающейся популяции клеток выполняют так, как описано выше (пример 1). При корректном выполнении этих условий продукция МКА восстанавливается до уровня 0,52-0,54 мкг/мл. Все образцы культуральной среды,

Стр.: 7 RU 2 528 868 C1

отбираемой в моменты ее замены равными объемами свежей среды, собирают во флакон для последующего выделения из нее моноклональных иммуноглобулинов.

Тиражирование клеток гибридомы in vivo в брюшной полости сингенного животного

- наиболее эффективный способ накопления высоких концентраций МКА. Животным предварительно внутрибрюшинно вводят по 0,4 мл стерильного минерального масла, пристана - 2,6,10,14-тетраметил-пентадекана или неполного адъюванта Фрейнда. Через 5-7 суток мышам внутрибрюшинно вводят по 2·106-4·106 клеток гибридомы. После накопления асцитической жидкости ее собирают. Клетки осаждают центрифугированием, надосадочную жидкость отделяют и используют для выделения антител методом сульфатного трехкратного переосаждения белка при 50% насыщении сульфата аммония.

Рыхлый осадок центрифугируют при 12000 об/мин в течение 20 минут, надосадочную жидкость удаляют. Осадок растворяют в 0,01 М фосфатном буфере, диализуют до полного удаления ионов сульфата аммония. Полученный раствор моноклональных иммуноглобулинов стерилизуют методом мембранной фильтрации, ампулируют и хранят при минус 20°C до момента использования. Концентрацию белка в растворе МКА определяют спектрофотометрически при длине волны 280 нм.

Специфическую активность МКА определяют с помощью ТИФМ. За сутки до постановки реакции в лунки полистироловой пластины для иммуноферментного анализа вносят по 100 мкл раствора антигена (с концентрацией 7-10 мкг/мл по белку) в 0,05 М карбонатно-бикарбонатном буфере, pH 9,5. Пластину в течение ночи выдерживают при 4-8°C, затем трижды отмывают забуференным физраствором с 0,05% твина-20 (ЗФР-Т) и выполняют этап блокирования свободных участков пластика 1% раствором бычьего сывороточного альбумина, внося в каждую лунку по 100 мкл этого раствора.

Пластину инкубируют при 37°C в термостате в течение 30 минут и вновь трижды отмывают ЗФР-Т. Следующий этап - внесение в лунки пластины по 100 мкл различных разведений МКА, приготовленных на 0,1 М фосфатном буфере, pH 7,4, с 0,05% твинаФБС-Т). Время инкубации - 1 ч при 37°C, трехкратное отмывание и внесение антивидового конъюгата в рабочем разведении по 100 мкл. Конъюгат представляет собой антитела диагностические против IgG(H+L) белой мыши, меченные пероксидазой (коммерческий препарат). Пластину инкубируют при 37°C в течение 1 ч, трижды отмывают. В заключение в лунки вносят по 100 мкл смеси перекиси водорода с хромогеном. Пластину помещают в защищенное от света место. Реакция ферментсубстрат длится не более 20-25 минут при комнатной температуре. Для ее остановки используют стоп-реагент. Результаты реакции (оптическую плотность (ОП) содержимого лунок) регистрируют на планшетном фотометре при длине волны, соответствующей характеристике применяемого хромогена. МКА 1E2/E5, выделяемые из асцитической жидкости, активны в разведениях 1:105-5:106.

Средний объем асцитической жидкости, получаемый от одной мыши при культивировании гибридомы CCHFV Vd-2 (1Е2/Е5) in vivo, - 3-4 мл, концентрация МКА

- 8-10 мг/мл.

Пример 3. Проверка заявленных полезных свойств МКА 1E2/E5 в ИФА.

Для оценки целесообразности использования полученного МКА в качестве одного из реагентов в наборе для выявления антигенов вируса ККГЛ была изучена специфическая активность МКА 1E2//E5.

В качестве референс-препарата использованы слабые разведения образца, содержащего антигены вируса ККГЛ и один концентрированный образец, не содержащий их.

–  –  –

Образец 1. Рекомбинантный белок, содержащий аминокислотные последовательности, аналогичные белкам вируса ККГЛ изолят «1-2»;

Образец 2. Отрицательный контроль - смесь лизатных белков перевиваемой линии клеток аденокарциномы надпочечников человека SV-13 и Е.

coli (вероятные примеси образца №1).

Диагностическая конструкция построена по схеме прямого твердофазного трехстадийного ИФА разновидности двойной сэндвич. В нее включены два моноклональных компонента: планшет иммуносорбент с иммобилизованными на поверхности лунок МКА - к белкам вируса ККГЛ и конъюгат МКА-биотин, выявляющий образованные иммунные комплексы антител иммуносорбента с антигенами вируса ККГЛ. Для повышения чувствительности реакции обнаружения искомого антигена последовательно применены два конъюгата: МКА-биотин и образующий крепкую связь с ним стрептавидин-полипероксидаза хрена (СПХ, «STD GmbH», Германия). Последний состоит из одной молекулы стрептавидина и 800 молекул пероксидазы, его применение повышает чувствительность ИФА в 200-300 раз относительно классического конъюгата белок-фермент. Визуализация результатов анализа осуществляется добавлением к образовавшимся иммунным комплексам раствора хромогена 3,3,5,5-тетраметиленбензидина («Moss Inc», США) с последующей фиксацией окраски раствором серной кислоты и регистрацией на планшетном фотометре в единицах ОП.

Для активации иммуносорбента (96-луночный планшет из модифицированного полистирола, международная классификация «Maxisorp») был подобран состав сорбционного раствора. Для уменьшения фона в результатах анализа, а также придания иммуносорбенту стабильности при хранении, наиболее эффективным оказалось использование карбонатного буферного раствора с последующей блокировкой свободных участков пластика раствором казеина и сахарозы.

Полезные свойства МКА 1E2//E5 были изучены как применительно к активации им иммуносорбента, так и к использованию его в качестве компонента конъюгата МКАбиотин.

30 Для подбора оптимальной концентрации МКА в иммуносорбенте с целью выявления специфичного сигнала при низких концентрациях антигена вируса ККГЛ для МКА 1E2//E5 было приготовлено четыре 10-кратных разведения, начиная с 0,15 мкг в лунку.

Оптимальная концентрация устанавливалась в ИФА.

Для получения конъюгата МКА-биотин была использована рутинная процедура биотинилирования: добавление к диализованным против гидрокарбонатного раствора МКА сульфо-NHS-биотина с последующей очисткой конъюгата от не связавшегося биотина гель-фильтрацией на колонке с сефадексом G-25.

Оптимальная концентрация полученного согласно этой методике конъюгата МКА 1E2//E5-биотин была установлена в ИФА путем использования четырех последовательных отличающихся в 10 раз разведений биотинилированных МКА по отдельности, начиная с максимальной - 150 мкг/мл.

На первой стадии ИФА исходные образцы разводили в 100 раз раствором трисЭДТА с добавлением тритона X-100 и инкубировали в лунках иммуносорбента на основе различных концентраций МКА 1E2//Е5 1 ч при 37°C. После пятикратной отмывки ФСБ-Т в лунки планшета вносили конъюгат МКА 1Е2//Е5-биотин и инкубировали 1 ч при 37°C. Затем после аналогичной отмывки в лунки планшета вносили раствор СПХ и инкубировали 1 ч при 37°C. На стадии визуализации иммунных комплексов в лунки

Стр.: 9 RU 2 528 868 C1

планшета внесли раствор хромогена и инкубировали 15 мин при 37°C. Результаты учитывали при длине волны поглощения 450 нм. Для каждого значения ОП образца №1, содержащего антиген вируса ККГЛ, определяли коэффициент позитивности (Кпоз) как отношение его ОП к ОП отрицательного контроля №2 в каждой точке разведения МКА иммуносорбента и конъюгата.

Данные по определению оптимальных концентраций представлены в таблице 1.

Эффективность выявления антигена вируса ККГЛ в образце №1 оценивали по максимальному показателю Кпоз МКА 1E2/E5-биотин (в единицах Кпоз).

Как видно из представленной таблицы 1, перспективным следует считать 10 одновременное использование МКА 1E2/E5 для активации иммуносорбента в диапазоне концентраций 0,15-1,5 мкг/мл, а в качестве компонента конъюгата в рабочем разведении 15 мкг/мл. Полученные данные свидетельствуют о значимой авидности МКА 1E2/E5 к эпитопам белков вируса ККГЛ.

Таким образом, перечисленные выше свойства гибридомы-продуцента МКА позволили сделать следующее заключение. Штамм культивируемых гибридных клеток животного Mus musculus L. (авторское название клеточной линии CCHFV Vd-2) предназначен для получения моноклонального антитела 1E2/E5 к вирусу Крым-Конго геморрагической лихорадки, относящегося к классу IgG1. Концентрация иммуноглобулинов в культуральной среде составляет 0,53 мкг/мл. Предложенный штамм является продуцентом моноклональных иммуноглобулинов - одного из компонентов тест-системы иммуноферментной для обнаружения вируса Крым-Конго геморрагической лихорадки в пробах биологического материала.

Список использованных источников

1. Международные медико-санитарные правила (2005 г.). - 2-изд. - ВОЗ, 2008. - 90 с.

2. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.4.2318-08 «Санитарная охрана территории Российской Федерации».

3. Специфическая индикация патогенных биологических агентов. Практическое руководство / Под ред. Г.Г. Онищенко. - М., 2006. - 288 с.

4. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство / Под ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева. - М.: ОАО "Издательство "Медицина", издательство "Шико", 2009. - 472 с.

5. МУК 4.2.3007-12 «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней».

6. Вышемирский О.И., Костиков М.А., Гордеева З.Е., Мельникова Е.Э., Свешникова Н.А., Гайдамович С.Л. / Выделение и идентификация шести штаммов вируса Крымской геморрагической лихорадки от больных в Таджикистане // ВИНИТИ, т.27, Вирусология, М., 1992. - с.53-57.

7. Вышемирский О.И. Анализ антигенной структуры штаммов вируса крымскойКонго геморрагической лихорадки с помощью моноклональных антител // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.м.н. - М., 1993.

8. Гайдамович С.Я., Львова А.И., Обухова В.Р. и др. Антитела к арбовирусам в асците иммунизированных мышей // Вопр. вирусол. - 1969. - №6. - С.676-683.

9. Евченко Ю.М., Львов Д.К., Сысолятина Г.В. и др. Зараженность клещей Hyalomma marginatum Koch. 1844 вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в эпидемический сезон 2000 г. // Вопр. вирусол. - 2001. - №4. С.18-20.

<

–  –  –

Формула изобретения Штамм культивируемых гибридных клеток животного Mus musculus L. CCHFV Vdдепонированный в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-ОБОЛЕНСК» под номером H-26, являющийся продуцентом 30 моноклонального антитела 1E2/E5 к вирусу Крым-Конго геморрагической лихорадки, пригодного для изготовления на его основе одного из компонентов набора реагентов для иммуноферментного выявления антигенов вируса Крым-Конго геморрагической лихорадки в пробах биологического материала.

Похожие работы:

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 513 693 C1 (51) МПК C12N 7/00 (2006.01) A61K 35/76 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2012139683/10, 18.09.2012 (21)(22) Заявка: (72) Автор(ы): Носик Марина Николаевна (RU), (24) Дата на...»

«НАУКА И ОБЩЕСТВО В ЭПОХУ ТЕХНОЛОГИЙ И КОММУНИКАЦИЙ МАТЕРИАЛЫ МЕЖДУНАРОДНОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ 3 декабря 2015 года Москва УДК 001 ББК 73 Н34 Редакционная коллегия: Рибокене Е.В. – к.э.н., доц.; Аниол А.В. – к.т.н., доцент; Васильева Л.И. – к.п.н., доц.; Водопьянова...»

«СООТНОШЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНО ТИПОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ ОРГАНИЗОВАННОСТИ И САМОРЕАЛИЗАЦИИ ЛИЧНОСТИ С.С. Кудинов Кафедра социальной и дифференциальной психологии Российский университет дружбы народо...»

«Родительское собрание "Возраст первой любви" (семинартренинг) Цель: отработка с родителями навыков воспитательного взаимодействия с детьми, испытывающими чувство первой влюбленности.Задачи: Добиться осознания родителями важно...»

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 572 592 C2 (51) МПК H01R 4/02 (2006.01) H01R 4/18 (2006.01) H01R 13/405 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2013108359/07, 01.07.2011 (21)(22) Заявка: (...»

«46 вычислительные методы и программирование. 2012. Т. 13 УДК 004.043 ИНТЕГРАЦИЯ АЛГОРИТМА КЛАСТЕРИЗАЦИИ FUZZY C-MEANS В POSTGRESQL Р. М. Миниахметов1, М. Л. Цымблер1 Интеграция алгоритмов интеллект...»

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 524 204 C2 (51) МПК A61K 38/16 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) A61P 3/10 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2009145054/15, 3...»

«Утвержден АЮВП.468382.004РЭ-ЛУ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНАЯ СИСТЕМА АВТОМАТИЗИРОВАННОГО ВОЖДЕНИЯ ПОЕЗДОВ ПОВЫШЕННОЙ МАССЫ И ДЛИНЫ С РАСПРЕДЕЛЕННЫМИ ПО ДЛИНЕ ЛОКОМОТИВАМИ ИСАВП-РТ Руководство по эксплуатации АЮВП.468382.004РЭ Инв. N подл. Подпись и дата Взамен инв. N Инв. N дубл....»

«Питер Хизер ВЕЛИКИЕ ЗАВОЕВАНИЯ ВАРВАРОВ Peter Heather EMPIRES AND BARBARIANS THE FALL OF ROME AND THE BIRTH OF EUROPE Питер Хизер ВЕЛИКИЕ ЗАВОЕВАНИЯ ВАРВАРОВ ПАДЕНИЕ РИМА И РОЖДЕНИЕ ЕВРОПЫ Москва УДК 94(430).012 ББК 63.3(0)4 Х43 Охраняется законодательством РФ о защите интеллектуальных прав. Воспрои...»










 
2017 www.lib.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - электронные материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.